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qiagen205311QuantiTect Rev. Transcription Kit

  • 更新時(shí)間:  2023-07-24
  • 產(chǎn)品型號(hào):  qiagen205311
  • 簡(jiǎn)單描述
  • qiagen205311QuantiTect Rev. Transcription Kit
    QuantiTect Reverse Transcription Kit方便快速的操作過程可實(shí)現(xiàn)高效的逆轉(zhuǎn)錄,并有效去除基因組DNA。應(yīng)用gDNA Wipeout Buffer可高效去除RNA樣本中的基因組DNA污染。通過逆轉(zhuǎn)錄酶、緩沖夜和*的引物混合物可實(shí)現(xiàn)高效的逆轉(zhuǎn)錄。合成的cDNA經(jīng)過優(yōu)化可用于r
詳細(xì)介紹

qiagen205311QuantiTect Rev. Transcription Kit 

  • cDNA合成和gDNA去除僅用20分鐘完成
  • 有效去除基因組DNA,無需設(shè)計(jì)RNA特異性引物或探針
  • 高特異性,即便是低豐度的轉(zhuǎn)錄本也能獲得高產(chǎn)量的cDNA
  • 轉(zhuǎn)錄本的5' 和3' 端區(qū)域都可以進(jìn)行cDNA 合成

For 50 x 20 ul reactions: 100 ul 7x gDNA Wipeout Buffer, 50 ul Quantiscript Reverse Transcriptase, 200 ul 5x Quantiscript RT Buffer, 50 ul RT Primer Mix, 1.9 ml RNase-Free Water

逆轉(zhuǎn)錄試劑盒組分確保高效、高靈敏的Real-Time RT-PCR

組分優(yōu)點(diǎn)
gDNA Wipeout Buffer僅在real-time RT-PCR 中檢測(cè)RNA
Quantiscript Reverse Transcriptase

可用于廣泛RNA起始量(10 pg to 1 µg RNA),高特異性

Quantiscript RT Buffer可通讀困難模板
RT Primer Mix所有轉(zhuǎn)錄本區(qū)域合成cDNA, 甚至從5' 端區(qū)域

qiagen205311QuantiTect Rev. Transcription Kit 

原理

為獲得準(zhǔn)確的real-time RT-PCR基因表達(dá)分析結(jié)果,很重要的是僅擴(kuò)增和檢測(cè)cDNA。基因組DNA的干擾可通過設(shè)計(jì)橫跨外顯子/外顯子邊界的引物或探針避免。盡管如此,在某些特殊情況下(如:cDNA來自一個(gè)單外顯子基因),起始RNA樣品必須無基因組DNA。

使用QuantiTect Reverse Transcription Kit,基因組DNA污染物可使用*的gDNA去除緩沖液迅速有效的去除(見圖:“高效去除基因組DNA,確保精確的Real-Time RT-PCR”)。因?yàn)榧兓疪NA樣品后無需另外采用DNA酶消化,從而可節(jié)省時(shí)間和費(fèi)用。并且也無需設(shè)計(jì)RNA特異性引物和探針。

低豐度轉(zhuǎn)錄本獲得更高產(chǎn)量的cDNA

 CT values for IL12A
(low expression)

CT values for IL1RN
(higher expression)

Input RNA (ng)QIAGENSupplier AIIQIAGENSupplier AII
100030.932.023.124.9
10034.235.426.326.6
1037.846.829.730.3
1N.D.N.D.32.434.5

應(yīng)用Real-time,兩步法RT-PCR 分析IL12A 和IL1RN,起始RNA量不同 。應(yīng)用QuantiTect Reverse Transcription Kit 或來自供應(yīng)商Supplier AII的試劑盒逆轉(zhuǎn)錄總 RNA 。在 ABI PRISM 7900 上應(yīng)用的QuantiTect Probe PCR Kit 、IL12A或 IL1RN的 QuantiTect Gene Expression Assays 分析合成的。 應(yīng)用凱杰試劑盒CT值較低,尤其中等豐度的基因IL12A(粗體),cDNA產(chǎn)量更高。N.D.:未檢測(cè)(Not detected)。

RT Primer Mix包含有特別優(yōu)化的oligo-dT和隨機(jī)引物的混合物,使cDNA合成可從RNA轉(zhuǎn)錄本的各個(gè)區(qū)域起始,甚至可從5'區(qū)域開始(見圖:“高靈敏度檢測(cè)12.5 kb 轉(zhuǎn)錄本5'區(qū)域的靶分子”)。相對(duì)于其他供應(yīng)商提供的試劑盒來說,QuantiTect Reverse Transcription Kit為real-time PCR分析提供高產(chǎn)量的cDNA,無需考慮待擴(kuò)增目標(biāo)序列位于轉(zhuǎn)錄本的哪個(gè)區(qū)域。同時(shí),QuantiTect Reverse Transcription Kit也確保了real-time RT-PCR結(jié)果更好的重復(fù)性。

 

操作流程

使用QuantiTect逆轉(zhuǎn)錄試劑盒可在20分鐘內(nèi)去除基因組DNA和合成cDNA(見流程圖)。由于兩個(gè)反應(yīng)均在同一孵育溫度并使用預(yù)混液構(gòu)建反應(yīng),因此操作過程快速且方便。相反,供應(yīng)商I提供的試劑盒操作需更多移液步驟且經(jīng)常需要調(diào)整孵育溫度,因此需要更長(zhǎng)時(shí)間和更多手動(dòng)操作。

 

應(yīng)用

QuantiTect Reverse Transcription Kit可從各種類型的起始樣品中合成cDNA以實(shí)現(xiàn)高效和高靈敏度的real-time RT-PCR,包括激光顯微切割樣品和活組織切片樣品。與其他供應(yīng)商提供的試劑相比,QuantiTect Reverse Transcription Kit在檢測(cè)低豐度基因時(shí)具有更高的靈敏度(見圖:“Real-Time,兩步法RT-PCR精確度更高”)。

為獲得高特異性和高靈敏度的real-time RT-PCR結(jié)果,又避免耗時(shí)的反應(yīng)步驟優(yōu)化過程,我們推薦QuantiTect Reverse Transcription Kit和其他QuantiTect產(chǎn)品聯(lián)合使用。包括經(jīng)優(yōu)化的PCR反應(yīng)預(yù)混液和即用型引物,使用SYBR Green染料法或序列特異性探針法進(jìn)行 real-time RT-PCR。

Images

高效去除基因組DNA,確保精確的Real-Time RT-PCR — A 高靈敏度檢測(cè)12.5 kb轉(zhuǎn)錄本5'區(qū)域的靶分子 快速方便的cDNA合成 高靈敏度的Real-Time,兩步法RT-PCR

 

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