Thermo Pierce™ BCA 蛋白定量試劑盒 分子生物試劑
Thermo Pierce™ BCA 蛋白定量試劑盒
Pierce BCA 蛋白定量試劑盒是一種雙組分、高精度、兼容去垢劑的蛋白定量試劑,可準(zhǔn)確測定蛋白濃度。對(duì)于蛋白研究中的常見樣品類型,Pierce BCA 試劑均可準(zhǔn)確測定蛋白濃度。Pierce BCA 試劑可用于評(píng)估全細(xì)胞裂解物、親和柱分離組分和蛋白樣品純化的產(chǎn)量,還可在工業(yè)應(yīng)用中用于蛋白污染的監(jiān)測。與大多數(shù)染料結(jié)合法相比,BCA蛋白定量法受蛋白質(zhì)氨基酸組成差異的影響更小,因此有更高的蛋白間定量一致性。
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BCA 蛋白定量試劑盒的特點(diǎn)包括:
•比色法測量—可以目測評(píng)估,也可使用標(biāo)準(zhǔn)分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀 (562 nm) 進(jìn)行測量
• 高度一致性—與染料結(jié)合法 (Bradford) 相比,BCA定量法的蛋白間差異更小
• 兼容性強(qiáng)—在大多數(shù)離子型和非離子型去污劑的常見濃度下,性能不受影響
• 定量時(shí)間—30 分鐘孵育;與傳統(tǒng) Lowry 法相比,操作更簡單,且檢測速度快 4 倍
• 檢測范圍—BSA 的線性工作范圍為 20 至 2000 µg/mL
• 高靈敏度—使用增強(qiáng)方案,可檢測濃度低至 5 µg/mL 的樣品
測定工作原理
BCA 蛋白測定法是在堿性環(huán)境下,通過蛋白將 Cu2+ 還原為 Cu1+ ,再通過二辛可寧酸 (BCA) 來檢測亞銅陽離子 (Cu1+) 。步是銅與堿性環(huán)境中的蛋白質(zhì)螯合,形成淺藍(lán)色復(fù)合物,這一過程被稱為雙縮脲反應(yīng)。在該反應(yīng)(雙縮脲反應(yīng))中,由三個(gè)或更多氨基酸殘基的肽在含酒石酸鈉鉀的堿性環(huán)境中與銅離子形成有色螯合復(fù)合物。
在顯色反應(yīng)的第二步中,BCA 與步形成的還原型(亞銅)陽離子發(fā)生反應(yīng)。兩分子 BCA 與一個(gè)亞銅離子螯合,產(chǎn)生深紫色反應(yīng)產(chǎn)物。BCA/銅復(fù)合物是水溶性的,在 562 nm 處具有強(qiáng)線性吸收,且吸收度隨蛋白質(zhì)濃度增加而升高。該復(fù)合物的靈敏度(檢測下限)大約是個(gè)反應(yīng)中淡藍(lán)色的 100 倍。
反應(yīng)很大程度上受到蛋白氨基酸序列中四個(gè)氨基酸殘基(半胱an酸、胱an酸、酪an酸和色an酸)的影響。然而,不同于考馬斯染料結(jié)合法,肽鏈也有助于顏色形成,因此可將不同蛋白間的測量差異降至zui低
Thermo Pierce™ BCA 蛋白定量試劑盒