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凱杰試劑盒EndoFree Plasmid Maxi Kit (10) 分子生物試劑

  • 更新時(shí)間：  2023-07-27
  • 產(chǎn)品型號(hào)：  12362
  • 簡(jiǎn)單描述
  • 凱杰試劑盒EndoFree Plasmid Maxi Kit (10)
    純化得到至多10 mg的無內(nèi)毒素高轉(zhuǎn)染級(jí)純質(zhì)粒或柯斯質(zhì)粒DNA


    純化得到的DNA內(nèi)毒素水平低于0.1 EU/µg


    純化流程快，同時(shí)去除內(nèi)毒素



    獲得高產(chǎn)量、高拷貝質(zhì)粒DNA



    使用LyseBlue，獲得的裂解和高產(chǎn)量的DNA
詳細(xì)介紹

凱杰試劑盒EndoFree Plasmid Maxi Kit (10)

純化得到至多500 μg無內(nèi)毒素高轉(zhuǎn)染級(jí)純質(zhì)粒或柯斯質(zhì)粒DNA

  • 純化得到的DNA內(nèi)毒素低于0.1 EU/µg

  • 純化流程快，同時(shí)去除內(nèi)毒素

  • 獲得高產(chǎn)量的高拷貝質(zhì)粒DNA

  • 使用LyseBlue，獲得的裂解和高產(chǎn)量的DNA

EndoFree Plasmid Kits基于陰離子交換技術(shù)，可快速制備不含內(nèi)毒素的質(zhì)粒DNA。QIAfilter Cartridges通過過濾快速澄清裂解液，DNA產(chǎn)量至多500 μg（Maxi）、2.5 mg（Mega）和10 mg（Giga）。制備的DNA純度超過兩次CsCl梯度離心法所得DNA的純度，非常適合超轉(zhuǎn)染級(jí)純的應(yīng)用。

質(zhì)粒純化方法與轉(zhuǎn)染效率。

使用兩種方法獨(dú)立制備pRSVcat，分別使用脂質(zhì)體介導(dǎo)的方法轉(zhuǎn)染到COS-7、HeLa和LMH細(xì)胞中，及使用磷酸鈣轉(zhuǎn)染至Huh7細(xì)胞中。平均轉(zhuǎn)染效率以相對(duì)于QIAGEN Plasmid Kit制備的DNA的轉(zhuǎn)染效率表示。

凱杰試劑盒EndoFree Plasmid Maxi Kit (10)

性能

EndoFree Plasmid Maxi Kit將高效的內(nèi)毒素去除步驟整合到質(zhì)粒純化過程中，不需要額外步驟，也不需用親和柱去除脂多糖。通過QIAfilter Maxi Cartridge過濾細(xì)菌裂解液，通過重力流QIAGEN-tip 500陰離子交換柱純化質(zhì)粒DNA。100–250 ml培養(yǎng)菌液至多可純化500 µg DNA。（培養(yǎng)量取決于質(zhì)粒拷貝數(shù)量、插入片段大小、宿主菌和培養(yǎng)介質(zhì)。）純化的DNA無內(nèi)毒素（<0.1 EU/µg DNA）。

EndoFree Plasmid Kits去除細(xì)菌在裂解過程中釋放的內(nèi)毒素，內(nèi)毒素會(huì)影響原代細(xì)胞和敏感培養(yǎng)細(xì)胞的DNA轉(zhuǎn)染。從EndoFree Plasmid Kits得到的無內(nèi)毒素DNA高度適用于可重復(fù)且結(jié)果可靠的轉(zhuǎn)染。QIAGEN超純無內(nèi)毒素DNA也適用于基因治療研究和其他敏感應(yīng)用。

質(zhì)粒制備中的內(nèi)毒素水平*
質(zhì)粒準(zhǔn)備方法內(nèi)毒素(EU?/µg DNA)平均轉(zhuǎn)染效率?
EndoFree Plasmid Kit0.1154%
QIAGEN Plasmid Kit9.3100
2x CsCl2.699%
Silica-gel slurry1230.024%
* 宿主菌：大腸桿菌DH5α  質(zhì)粒：pRSVcat.
? 1 ng LPS = 1.8 EU.
? 根據(jù)表中數(shù)據(jù)計(jì)算 "Plasmid purification method versus transfection efficiency".
無內(nèi)毒素DNA配合原代細(xì)胞得到高轉(zhuǎn)染率*
DNA純化方法轉(zhuǎn)染細(xì)胞百分比
EndoFree Plasmid Kit21.0% ± 0.93
QIAGEN Plasmid Kit8.1% ± 0.57
Silica-gel slurry5.2% ± 0.74
* 原代兔胃壁細(xì)胞轉(zhuǎn)染pEGFP-N2（CLONTECH），pEGFP-N2由所示的方法制備。使用Effectene Transfection Reagent進(jìn)行轉(zhuǎn)染。該數(shù)據(jù)是細(xì)胞表達(dá)GFP的百分率，由轉(zhuǎn)染48小時(shí)后綠色熒光細(xì)胞數(shù)量確定。轉(zhuǎn)染效率是每種純化方法制備的超過2個(gè)不同的DNA中6–9個(gè)復(fù)制樣本的平均值。（數(shù)據(jù)由C. Chew and J. Parente友情提供， Department of Molecular Medicine and Genetics, Medical College of Georgia, Augusta, Georgia, USA.）
原理

純化的質(zhì)粒DNA內(nèi)毒素污染水平取決于所用的純化方法。硅膠技術(shù)純化的DNA具有非常高的內(nèi)毒素水平。QIAGEN、QIAfilter、HiSpeed Plasmid Kits和兩次CsCl超速離心可獲得相對(duì)低水平內(nèi)毒素的純DNA。EndoFree Plasmid Buffer Set包含完整的內(nèi)毒素去除步驟，獲得<0.1 EU/µg的質(zhì)粒DNA。





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